本生知識分享：人γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒樣本的收集和保存

　　γ-干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)是水溶性二聚體細(xì)胞因子 。是II型干擾素的成員。*初叫巨噬細(xì)胞活化因子。中文名 γ干擾素 外文名 Interferon-γ,IFN-γ 歸 類II型干擾素 原 名巨噬細(xì)胞活化因子。γ-干擾素具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤特性?？梢耘c結(jié)合到γ-干擾素受體(IFNGR)，γ-干擾素受體(由兩個(gè)亞基組成。γ-干擾素結(jié)合并激活其受體調(diào)節(jié)JAK-STAT通路。γ-干擾素激活抗原提呈細(xì)胞，通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子T-bet而促進(jìn)I型輔助T細(xì)胞(Th1細(xì)胞)的分化。γ-干擾素是I型輔助T細(xì)胞(Th1細(xì)胞)的標(biāo)志性的細(xì)胞因子。II型輔助T細(xì)胞(Th2細(xì)胞)釋放白細(xì)胞介素-4 (IL-4) 和白細(xì)胞介素-13 (IL-13)。自然殺傷細(xì)胞和CD8T細(xì)胞也產(chǎn)生γ-干擾素。γ-干擾素通過迅速降解RANK-RANKL信號通路的TRAF6而抑制破骨細(xì)胞形成。

　　標(biāo)本的采集和保存

　　ELISA試驗(yàn)所用標(biāo)本主要為血清，也可以用經(jīng)過預(yù)處理的唾液、尿液、糞便等生物材料。患者標(biāo)本可能含有干擾試驗(yàn)的免疫物質(zhì)，導(dǎo)致假陽性或者假陰性的結(jié)果，干擾因素一般可分為兩類，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、儲存時(shí)間過長及標(biāo)本凝固等。在血液采集和運(yùn)輸過程時(shí)，應(yīng)注意避免溶血。否則，紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA試驗(yàn)測定中，可能會增加非特異性顯色而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。血清標(biāo)本適宜在新鮮時(shí)檢測，若推遲檢測需將標(biāo)本低溫保存。一般說來，在7天內(nèi)檢測的血清標(biāo)本，可放置于2℃~8℃保存，超過1周檢測的需低溫冰存。因反復(fù)冰融會使抗體效價(jià)降低，所以，對需要保存做多次抗體測定的血清標(biāo)本，應(yīng)少量分裝并冰存。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心，否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。

　　加樣操作中，依次有3次加樣，即加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物。加標(biāo)本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在實(shí)際操作中揣摩使用技巧，避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時(shí)間使用時(shí)會因機(jī)械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn)，因此必須定期對加樣器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。加酶結(jié)合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時(shí)，應(yīng)將所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可濺出，不能產(chǎn)生氣泡，加酶試劑后要用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時(shí)應(yīng)注意各試劑盒顯色劑不能混用，添加順序不能顛倒，不能濺出孔外。標(biāo)本較多時(shí)，需要分批操作，以免加樣板過多，造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(尤其是在室溫較高時(shí))。*后，在微型振蕩器上震蕩lmin，以保證混勻。

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